自然界生物材料具有復(fù)雜動(dòng)態(tài)功能，如肌肉、皮膚、硬殼和骨骼等，它們擁有多重功能包括隨時(shí)間變化的能力和對(duì)多種刺激的響應(yīng)性。而合成生物學(xué)旨在利用工具來設(shè)計(jì)和改造生物體，從而模仿自然界生物材料的能力，賦予材料如損傷感知、威脅響應(yīng)、自我清潔、自我修復(fù)和自我降解等生物學(xué)特性。然而，將生物功能整合至固體材料（如塑料）中則面臨加工條件苛刻的挑戰(zhàn)，諸如活細(xì)胞、分離酶等。

今天小編和大家分享一篇今年4月份發(fā)表在ACS Synth Biol雜志上，名為“Cell-Free Protein Expression in Polymer Materials"的文章。該篇文章證明了聚合物嵌入的無細(xì)胞蛋白表達(dá)（CFPS）反應(yīng)是在材料中添加復(fù)雜、DNA可編程生物活性的有前途的新方法。并展示了CFPS反應(yīng)在熱和有機(jī)溶劑暴露下的顯著耐受性。這標(biāo)志著DNA可編程生物功能被引入合成材料中的可能性，為合成生物學(xué)領(lǐng)域帶來了新的研究方向和應(yīng)用前景。

圖1:CFPS粉末鑄造成聚合物

研究人員探索了通過熱壓法將CFPS反應(yīng)粉末嵌入到聚己內(nèi)酯（PCL）中的可行性。實(shí)驗(yàn)成功將CFPS粉末嵌入PCL中，通過手工熱壓機(jī)，將CFPS反應(yīng)物加熱壓制于PCL片之間。重新水合并孵化后，CFPS反應(yīng)粉末恢復(fù)活性，并在PCL片中觀察到熒光蛋白的表達(dá)且邊緣切割處的熒光信號(hào)更強(qiáng)，暗示水分滲入促進(jìn)了CFPS的局部激活。這些結(jié)果表明，熱壓工藝后，有可能在聚合物材料中恢復(fù)CFPS活性。

圖2:熱鑄CFPS-PCL

圖3:CFPS-PLGA膠片中局部功能的顯微觀察

研究人員通過將編碼大腸桿菌素E1的線性DNA與CFPS反應(yīng)體系結(jié)合，再嵌入PLGA材料中。在PLGA薄膜中表達(dá)抗菌蛋白大腸桿菌素E1來證明CFPS提供聚合物材料通常無法實(shí)現(xiàn)的生物有效載荷的能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，盡管CFPS-PLGA系統(tǒng)經(jīng)歷了有機(jī)溶劑處理和高溫加工，但其中的大腸桿菌素E1仍能保持活性。當(dāng)材料與水接觸時(shí)，大腸桿菌素E1能夠表達(dá)并有效抑制大腸桿菌的生長。這一成果不僅展示了CFPS技術(shù)在非生物材料中實(shí)現(xiàn)生物功能的強(qiáng)大能力，還為在聚合物材料中直接合成具有生物活性的抗菌蛋白提供了新途徑，對(duì)開發(fā)新型抗菌材料具有重要意義。

圖4:擴(kuò)展溶劑鑄造聚合物的功能

最后，研究團(tuán)隊(duì)演示了一種動(dòng)態(tài)感覺和響應(yīng)功能，這是聚合物材料中通常沒有的一種生物學(xué)通用能力。研究人員選擇了一個(gè)RNA腳架開關(guān)傳感器，通過將傳感器與比色報(bào)告酶聯(lián)系起來。利用包含編碼LacZ（B-半乳糖苷酶）的質(zhì)粒和同源觸發(fā)RNA的質(zhì)粒的凍干CFPS粉末樣品，制備了對(duì)特定RNA信號(hào)響應(yīng)的塑料傳感器。傳感器接觸觸發(fā)RNA時(shí)，可激活酶的表達(dá)，通過顏色變化指示目標(biāo)分子。該技術(shù)為聚合物材料賦予了生物傳感能力，且可靈活調(diào)整傳感器功能，開辟了合成生物學(xué)在材料科學(xué)的新應(yīng)用可能性。

本文探討了無細(xì)胞蛋白合成（CFPS）技術(shù)在聚合物材料中的應(yīng)用，進(jìn)一步證明了CFPS技術(shù)的廣泛應(yīng)用前景和在合成生物學(xué)領(lǐng)域的潛力。該技術(shù)能通過調(diào)整DNA序列并將CFPS反應(yīng)粉末嵌入到聚合物中以實(shí)現(xiàn)材料復(fù)雜的生物功能，如熒光蛋白產(chǎn)生、抗菌功能及傳感響應(yīng)等，為生物材料帶來動(dòng)態(tài)變化與多功能性。

備受追捧的工程生物材料概念包括使用活細(xì)胞賦予人為材料生物學(xué)中常見的新功能（傳感、自愈和動(dòng)態(tài)多功能性點(diǎn)等）。而CFPS系統(tǒng)可以用于在聚合物材料中實(shí)現(xiàn)其中許多目標(biāo)，規(guī)避了與維持細(xì)胞活力相關(guān)的挑戰(zhàn)以及轉(zhuǎn)基因生物釋放的擔(dān)憂，CFPS可以將應(yīng)用推向普通的材料和設(shè)備。

參考文獻(xiàn)：

Lee MS, Lee JA, Biondo JR, et al. Cell-Free Protein Expression in Polymer Materials. ACS Synth Biol. 2024;13(4):1152-1164. doi:10.1021/acssynbio.3c00628